Анализ на гепатит с качественный и количественный анализ

Содержание

Пцр на гепатит с: качественный и количественный анализ рнк вируса

Анализ на гепатит с качественный и количественный анализ

Полимеразная цепная реакция, а попросту ПЦР на гепатит С — современная методика диагностики вирусного воспаления печени. У болезни есть разновидности. Известны, к примеру, инфекции А и В типов.

Их симптоматика явная. Гепатит С, напротив, протекает скрытно, даже на острой стадии развития. ПЦР — надёжный способ ранней диагностики. Анализ позволяет подтвердить присутствие вируса в организме.

История применения полимеразной цепной реакции

Анализ ПЦР на гепатит стал общепринятым, стандартизированным в конце прошлого века.

До этого пройдены следующие этапы развития полимеразной диагностики:

  1. В 1970-х годах Хьелль Клеппе из Норвегии стал проводить эксперименты по увеличению фрагментов ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты). Её учёный удлинял при помощи праймеров. Так называют искусственные короткие нуклеиновые кислоты. Ввиду недостаточной изученности и неполной расшифровки строения ДНК, опыты Клеппе «не вышли» из стен лаборатории.
  2. В 1985 году в американском научном журнале появилась статья Кэри Мулисса. Он описал принципы проведения анализа с помощью многократного удвоения фрагментов исходного ДНК. В итоге Кэри Мулисса удостоили Нобелевской премии. Учёный получил её в 1993 году.
  3. Первоначально исследование проводилось при постоянном добавлении ДНК-полимеразы. Требовался нагрев. Высокие температуры распрямлялицепь ДНК. При этом полимераза инактивировалась, то есть становилась неактивной в реакции. Поэтому первая версия ПЦР была малоэффективной, требовала много времени и материалов.
  4. В 1986 году процедуру проведения анализа изменили. Стали использовать ДНК-полимеразу, полученную из термофильных бактерий. Такой материал устойчив к высоким температурам. Уменьшилось время проведения анализа, повысилась его точность и появилась возможность автоматизировать процесс.

Первоначально метод был запатентован. Права принадлежали компании «Хофман-Ла Рош». С 90-х годов прошлого века проведено несколько судов. К 2005 году истцамудалось заставить «Хофман-Ла Рош» отказаться от патента. Так ПЦР стала доступна для всех.



Суть анализа и механизм его проведения

В общих словах ПЦР — многократное копирование участков ДНК или РНК (рибонуклеиновой кислоты). «Размножают» заранее определённый фрагмент.

Для проведения исследования требуются:

  • предназначенный для репликации характерный участок РНК гепатита С;
  • два типа синтетического праймера;
  • катализатор реакции, коим служит ДНК-полимераза;
  • буферный раствор;
  • ионы магния;
  • высококипящее масло.

Во время анализа на выявление возбудителя гепатитаили других инфекционных заболеваний проводят 20-35 циклов.

В каждом из них последовательно повторяется 3 операции:

  1. Вначале материал возбудителя нагревают минимум до 90 градусов. В это время цепочки ДНК начинают разворачиваться.
  2. Следующая операция — отжиг, проводится при температуре 60-72 градуса. В этих условиях начинают работать праймеры.
  3. На заключительном этапе добавляется ДНК-полимераза, которая реплицирует матричную цепь.

Каждая операция длится определённое время. Денатурация или нагрев проводится на протяжении минимум 2 минут. Самая короткая операция отжига выполняется за 30 секунд. Последняя стадия самая длительная, может занять 7—10 минут.

Виды ПЦР

С помощью ПЦР на гепатит выявляют возбудителя вирусного воспаления печени. Однако анализ востребован и при выявлении отцовства. Также исследование используется в криминалистике.

Если предстоит диагностика гепатита С, врачи используют несколько разновидностей анализа ПЦР:

  1. Качественный анализ на гепатит. Исследование показывает наличие или отсутствие вируса в крови. У качественного исследования есть настройки чувствительности. Если патогена в крови менее 10МЕ (международных единиц) на миллилитр, результат исследования отрицательный. Верхняя граница чувствительности равна 500 МЕ на миллилитр.
  2. Гепатит С количественный анализ. Его ещё называют исследованием на определение вирусной нагрузки. Определяют число РНК вируса гепатита C. Количественный анализ тоже проводится на 1 миллилитре крови пациента.

Качественный анализ проводится перед-, либо во время лечения. С помощью исследования врачи находят ответ на 3 вопроса. Во-первых, определяется степень риска передачи возбудителя от больного человека здоровому. Во-вторых, проверяется эффективность проводимого лечения. Третий ответ, «вытекающий» из результатов ПЦР — время, необходимое для терапии гепатита С.

Определяет ли ПЦР генотип и квазитип вируса

Вирусам свойственно быстро мутировать. Возбудитель гепатита С — рекордсмен среди них. Пытаясь остаться незамеченным иммунной системой человека, патоген меняет генетический набор. Его вариаций у гепатита С 11. Официально признаны 6. Прочие Всемирная Организация Здравоохранения не фиксирует, поскольку ещё не выявлены возбудители.

У каждой разновидности гепатита С имеются подвиды. Их именуют квазитипами. Первичные же вариации называются генотипами.

Для успешной борьбы с гепатитом С важно знать, какой именно генотип вируса попал в организм. В каждом конкретном случае применяются разные методики лечения.

Анализ ПЦР гепатита С даёт информацию о генотипе патогена, но не в 100% случаев. Если вирусная нагрузка низкая, определить разновидность возбудителя сложно.

Каждая разновидность вируса распространена в определённых географических зонах, а именно:

  • тип 1 в чаще встречается в государствах бывшего Советского Союза;
  • тип 2 чаще встречается в Европе и Северной Америке;
  • генотипы 5 и 6 редкие, характерны только для некоторых африканских и азиатских стран.

Исследование ПЦР в лабораториях направлено на выявление типов, распространённых в конкретном государстве. Поэтому порой выдаётся результат «не типируется». В этом случае, а также при низкой вирусной нагрузке, желательно пройти повторное исследование в лабораториях с более чувствительной аппаратурой.

Когда проводят ПЦР

К каждому медицинскому исследованию должны быть показания. По крайней мере, это касается обслуживания по полису обязательного медицинского страхования. Врач назначит цепную реакцию (или ПЦР) для диагностики гепатита, если имеются подозрения на воспаление печени.

К его симптомам относятся:

  1. Общая слабость. Пациент быстро утомляется. Слабость ощущается во всех органах и системах, постепенно нарастает.
  2. Чувство тяжести в животе. Наблюдаются болевые ощущения в области правого подреберья.
  3. Отсутствует аппетит. Пациент чувствует тошноту.
  4. Желтуха. Проявляется на острой стадии гепатита примерно у 70% больных.
  5. Сосудистые звёздочки на кожном покрове. Обычно появляются возле пупка.
  6. Боли в суставах. Напоминают ломоту при гриппе.

Качественный анализ проводят всем, при возникновении подозрений на гепатит при условии наличия должного оборудования. Количественную реакцию делают при подтверждённом диагнозе при начале лечения для определения метода терапии. Проводят анализ и во время лечения, дабы определить эффективность выбранного курса и сроки его окончания.

Подготовка к анализу

ПЦР-тест, как и любое медицинское исследование, проводится по правилам. Требования есть как к медицинским работникам, так и пациентам.

К сдаче проб нужно подготовиться:

  • перед сдачей анализа необходимо голодать 8—12 часов, поэтому исследование проводится утром;
  • неделю до посещения процедурного кабине нужно придерживать диеты, отказавшись от жирных, копчёных и солёных блюд, алкогольных напитков;
  • за неделю до ПЦР прекратить курить;
  • за сутки до сдачи проб нельзя проходить рентген, флюорографию, ультразвуковое исследование;
  • пациентки во время менструации не проходят анализ ПЦР на гепатит С,в связи активной гормональной перестройкой.

Приём некоторых медикаментов может повлиять на результаты анализа. Поэтому за неделю до ПЦР стоит отказаться от лекарств, а если это невозможно, сообщить о принимаемых средствах врачу.

Повлиять на результаты ПЦР могут также любые заболевания, в острой или хронической форме. Поэтому об известных диагнозах тоже сообщается доктору.

Расшифровка результатов анализа

Когда врачи расшифровывают результаты ПЦР, они определяют отклонения от нормы, получают данные о типе вируса.

Лаборатория выдаёт бланк, в котором указывается следующая информация:

  1. Обнаружен или нет вирус. Как правило, пишется «найдено» и «не найдено». Если речь идёт о качественном анализе ПЦР, это единственные данные на бланке.
  2. При количественном исследовании указывается уровень вирусной нагрузки. Прописывается число РНК-фракций на один миллилитр крови. Высокий уровень концентрации возбудителя гепатита — более 800 тысяч МЕ.
  3. В результатах анализа указывается генотип вируса гепатита С. Если определить подвид патогена не получилось, выдаётся результат «не типируется».
  4. Указывается в бланке и название проведённого теста.

В некоторых лабораториях расшифровку дополняют другой информацией. Это зависит от оснащённости учреждения, его специализации.

Стоимость ПЦР

На анализ крови ПЦР цена определяется множеством факторов:

  • престижностью лаборатории;
  • характером учреждения – в государственных клиниках за анализ берут меньше, нежели в частных;
  • сложностью исследования, так, количественный анализ дороже качественного.

Цена анализа ПЦР на вирус гепатита С варьируется в пределах от 400 до 11 тысяч рублей.

Исследование сложное, поэтому не стоит забывать о сроках. Обычно результаты анализа ждут от нескольких часов, до восьми дней. Скорость, как правило, зависит от объёма проделываемой лаборантами работы, типа аппаратуры. На изношенной и устаревшей технике в некоторых государственных клиниках анализ делают дольше.

Источник: https://gepatit.su/diagnostika/ptsr-analiz

Качественное ПЦР исследование на HCV и его расшифровка

Анализ на гепатит с качественный и количественный анализ

Гепатит Ц — вирусное заболевание, поражающие жизненно важный орган человека. Для того чтобы определить степень и тип болезни, а также назначить эффективное лечение, стоит пройти качественный анализ на гепатит С в крови.

ПЦР проводимый качественный анализ на гепатит С изучает ДНК вируса. Размер вириона данного теста равен 30-60 нм. Врачи отмечают, что данный микроорганизм способен мутировать за неопределенный промежуток времени. Более информативными результаты теста являются в утренние часы: с 08:00 до 11:00 и натощак.

  • Что делать если у вас гепатит С?

Виды ПЦР анализов

Стоит отметить, что ПЦР делится на три вида: количественный, качественный и генотипирование. По мнению специалистов, количественный более информативен, так как указывает на вирусную нагрузку, определяющую объем РНК инфекции. Также такой тест назначается пациента в начале назначения лечения и контроля на 12 неделе уже выбранного метода борьбы с вирусом.

Генотипирование устанавливает разновидность генотипа, располагающегося в крови больного.

Основные генотипы:

Генотип 1а, 1б

Генотип 2

Генотип гепатита С 3а

Согласно медицинской практике, качественный анализ особо применяем при установлении факта зараженности на 1-3 неделе инфицирования. Но даже пройдя тест, результаты которого окажутся отрицательными, человек может быть переносчиком болезни. Поэтому врачи рекомендуют повторить исследование через 10 дней.

Разница качественного и количественного исследований

Анализ ПЦР на гепатит С качественный имеет основное преимущество — можно сдавать спустя полторы-две недели после инфицирования, тогда когда количественный можно проводить спустя 4,12,24 недели.

Врачи отмечают, что иногда результаты обоих исследований могут сами себе противоречить.

Этому способствует, например, состояние больного: беременность, или загрязнение приборов для забора крови, или несоблюдение преддианостических правил пациентом.

К основным плюсам количественного метода можно отнести:

  • выявление генетической предрасположенности к болезни,
  • определение источника возбудителя вируса,
  • высокая чувствительность компонентов исследования.

Самым основным недостатком качественного метода считается ложноположительный или ложноотрицательный результат.

Расшифровка качественного анализа

Для того чтобы расшифровать результат, полученный качественным методом, следует обратить особое внимание на их интерпретацию: “положительный”, и “отрицательный”. Первый свидетельствует о том, что в организме есть РНК вируса. Тем, у кого диагностировали инфекцию в будущем назначают и количественную диагностику.

Но интерпретировать показания результата способен только врач.

Если у человека установили результат “отрицательный”, то в организме у пациента не обнаружено тел вируса, следовательно обратившийся человек здоров. Но врачи рекомендуют сдавать данный анализ повторно, через 10 дней, для того чтобы всецело убедиться в постановке результата.

Норма

Специалисты обращают внимание на то, что необходимо проводить исследование с использованием высокого порога чувствительности компонентов диагностики — 50 МЕ/мл. Данной цифре соответствуют Cobas test, РеалБест (15 МЕ/мл).

Показатель при особой чувствительности не должен превышать 600 МЕ/мл, тогда пациент полностью здоров. Если показатели зашкаливают, то необходимо провести количественный анализ, который поможет узнать очаг появления вируса.

Виды диагностических систем и их погрешности

Разновидность систем исследования присутствия или отсутствия болезни зависит от цели диагностики: тест проводится впервые или вторично. Это необходимо для получения максимально точного результата.

Например: если больной уже проходит лечение от гепатита С, но врач его сомневается в эффективности назначенного лечения или наоборот хочет определить степень прогрессии, то в таком случае специалист ПЦР будет использовать систему с 50 МЕ/мл чувствительностью и более. К примеру, анализаторы: Cobas Ampicolor — Test  и РеалсБест ВГС.

Также помимо ПЦР актуален и метод ТМА (транскрипционной амплификации), при котором степень диагностируемой чувствительности намного выше. Но и стоит он намного дороже.

Показания к назначению и где сдать анализ

Чаще всего данный анализ назначают при появлении первых симптомов патологии печени, обследовании, диагностике гепатита, при установлении активности/пассивности формы протекания болезни, циррозе печени или определении эффективности уже назначенного метода лечения.

Если у вас есть подозрения на гепатит С, то данный анализ сможет подтвердить или развеять опасения. Так же ознакомьтесь с возможными путями инфицирования гепатитом С в этой статье.

Качественный анализ помогает выявить присутствие/отсутствие болезни. Но как и в любой диагностике существуют свои отклонения: антитела JgM обнаружены в крови, то болезнь протекает остро и мучительно. Если при уже имеющемся лечении данный показатель снижается, то это говорит о том, что пациент на этапе выздоровления.

Лучше всего сдавать анализ в лаборатории при больнице, где Вы наблюдаетесь. Но если есть возможность, то и в любой платной лаборатории тоже можно. Главное, повторяющиеся или иные анализы, сдавать только в одной клинике, если, конечно, там не поставили ошибочный диагноз.

Это обусловлено тем, что у каждой лаборатории свои нормативные показатели, которые зависят от технике, на которой проводят исследование. Поэтому даже тот же показатель 600 МЕ/мл в одной лаборатории будет считаться нормой, а в другой — уже сигналом для установления диагноза “гепатит С”.

Поэтому следите за соблюдением таких элементарных вещей, из-за которых Вам могут поставить ошибочный диагноз.

На сегодняшний день, в мире уже появились препараты от гепатита С с эффективностью приближенной к 100% Современная фарм промышленность создала лекарства, которые практически не имеют побочных эффектов. Многие пациенты получают первые результаты в виде облегчения симптомов и снижения вирусной нагрузки уже через неделю приёма. Как действуют дженерики от гепатит с из Индии можно узнать тут.

На рынке компаний по перевозке индийского лекарства от гепатита С «GalaxyRus (Galaxy Super Speciality)»отлично зарекомендовала себя. Данная компания успешно помогает людям излечиться от недуга больше 2-х лет.

Отзывы и видео довольных пациентов вы можете посмотреть здесь. На их счету более 4000 людей, которые выздоровели благодаря купленным препаратам. Не откладывайте свое здоровье в долгий ящик, перейдите на сайт www.galaxyrus.

com или позвоните по номеру 8-800-3500-695 ,  + 7 (495) 369 00 95

Источник: https://medinfo.club/kachestvennyiy-analiz-na-gepatit-s/

Проведение анализа ПЦР на гепатит С и расшифровка результатов

Анализ на гепатит с качественный и количественный анализ

Анализ ПЦР гепатит С – это исследование, основной целью которого является идентификация генетического материала возбудителя. Анализ выявляет возбудитель заболевания методом использования полимеразной цепной реакции. Данная диагностика отличается высокой степенью точности, специфичностью к выявлению отсутствия или наличия вирусной инфекции.

Чтобы провести ПЦР анализ на определение вируса гепатита С у пациента берётся венозная кровь, которая потенциально содержит в себе РНК (рибонуклеиновая кислота) HCV искомого вируса.

Тест ПЦР на гепатит С подразумевает порядок действий, когда в частицы крови пациента добавляют:

  • праймеры (короткие искусственно-синтезируемые участки необходимо гена);
  • специальный фермент (РНК-полимераза).

После забора биологический материал отправляется на исследования в лабораторию. Одна порция крови нужна для проведения непосредственно ПЦР анализа, вторая – отправляется на исследование по методу ИФА.

Фермент способен за короткое время увеличить численность генетического материала вируса возбудителя. В специальном аппарате проводится несколько циклов тепловых и охлаждающих процессов.

На конечном этапе полученный материал сопоставляется с генами вируса и делается заключение о наличии или отсутствии патологии в организме пациента.

Суть и проведение ПЦР анализа в лаборатории. Снято каналом SiberianMedicalLaboratory.

Виды исследования

Существует 3 вида диагностики, дающие возможность определять наличия вируса гепатита С в организме человека:

  • генотипирование;
  • качественный;
  • количественный.

Качественный метод

Диагностика гепатита С качественным методом применима для пациентов, у которых в анализе крови определены антитела к вирусу. В случае наличия острой фазы РНК ВГС подобные диагностические мероприятия позволяют определить наличие заболевания за 1-2 недели после инфицирования. В этот период антитела к гепатиту С могут быть ещё не выработаны.

Количественный метод

Количественный метод диагностики используется для определения концентрации вируса в образцах крови. Подобный тест на виремию (степень концентрации) даёт возможность точно определить количество единиц вирусной РНК. Конечный результат выражается в соответственном объёме. Если речь идёт о количественном анализе, тогда показатели измеряются в 1 мл (1 куб. см).

Параметр вирусной нагрузки означает уровень инфекционности заболевания, то есть отображает степень «заразности» пациента. На практике это значит, что чем выше концентрация вируса в крови, тем больше шансов у пациента заразить окружающих гепатитом С. Количественный метод исследования также позволяет установить качество и результативность проведённого лечения.

Генотипирование

Генотипированием выявляют мутации возбудителя заболевания. Перед назначением лечебного плана определяют генотип вируса: от этого зависит качество и продолжительность терапии. Так, например, при лечении заболевания I-типа эффективность составляет 60%, в случае II, III-типа – около 80%.

Достоинства анализа ПЦР на гепатит

Среди основных достоинств проведения процедуры выделяют:

  1. Возможность ранней диагностики. ПЦР анализ способен определить наличие вируса на ранних стадиях заражения.
  2. Низкая погрешность результатов. Исследуемый биологический ресурс позволяет диагностировать участок генетического материала, который является характерным только для одного типа вирусной инфекции. Это обстоятельство позволяет не допустить ложных результатов диагностики.
  3. Высокая степень чувствительности. Анализ ПЦР способен выявлять РНК вируса в небольших количествах, что также дает возможность вовремя отследить скрытые инфекции.

Показания к проведению

Сдавать анализ ПЦР на гепатит C нужно, если есть:

  • наличие контактов с больными людьми, которое могло бы привести к заражению;
  • симптомы заболевания цирроза печени (увеличение селезенки, нехарактерные изменения размеров печени, обнаружение на животе венозного сплетения под кожей);
  • положительные результаты ИФА;
  • увеличение активности АСТ и АЛТ (проявляется в биохимическом анализе крови);
  • необходимость контроля ведения антивирусной терапии;
  • проведение начального этапа лечения для необходимости установления вирусной нагрузки;
  • проведение завершающего этапа терапии для исключения возможных рецидивов;
  • наличие у пациента гепатита В, чтобы исключить вариант развития смешанного поражения печени.

Как подготовиться к сдаче крови для ПЦР-исследования

Подготовка к ПЦР анализу включает следующие рекомендации:

  • забор крови проводится утром;
  • анализ проводится натощак, поэтому желательно выдержать перерыв между последним приёмом пищи 8-10 часов;
  • за несколько дней до проведения диагностики следует исключить жирную, острую и жареную пищу, алкогольные напитки и курение;
  • за сутки до анализа следует воздержаться от тяжёлых физических нагрузок, исключить занятия в спортзале или бассейне.

Результаты анализа: нормы и отклонения

Сам анализ делается недолго, а расшифровывает результаты ПЦР на гепатит С высококвалифицированный специалист гепатолог или инфекционист. На основании результатов анализа пациенту выставляется диагноз.

Чтобы правильно расшифровать результаты обследования, учитывают показатели:

  • биохимического анализа крови;
  • данные ультразвукового исследования;
  • результаты биопсии.

Расшифровка количественного анализа

При получении результатов количественного анализа ПЦР учитываются следующие показатели:

ПоказательХарактеристика
Не обнаруженоНорма здорового человека.

Данный показатель обозначает, что в организме человека не присутствует генетический материал вируса или его концентрация ниже порога чувствительности.

До 1,8*102 МЕ/млЗначение подобных результатов изучается с повышенной осторожностью, так как необходимо соотношение информации с другими видами диагностирования. Такой результат требует повторного проведения процедуры, ввиду того, что концентрация РНК возбудителя ниже порога количественного определения.
До 8*105 МЕ/млВирусная нагрузка данного параметра считается низкой. Снижение концентрации вируса говорит о том, что лечебные мероприятия проводятся эффективно.
Больше 8*105 МЕ/млВысокая вирусная нагрузка, следует пересмотреть подход к лечению.
Больше 2,4*107 МЕ/млВ этом случае концентрация РНК возбудителя достигает запредельных отметок, поэтому делать выводы об уровне вирусной нагрузке нет смысла. Чаще всего при таком результате назначается повторный тест с разведение частиц крови.

Расшифровка генотипирования

При получении анализов на генотипирование вируса можно обнаружить следующие варианты показателей:

ПоказательХарактеристика
Обнаружена РНК конкретного генотипаДанный результат показывает то, что в биологическом материале пациента найден вирус гепатита С конкретного генотипа и субтипа. Обозначается каждый генотип цифрой и латинской буквой.
Обнаружена РНК вируса гепатита СПри подобных результатах назначается повторное исследование, так как данный параметр обозначает наличие вируса гепатита, который не относится к 1,2,3 типу. Подобные случаи считаются редкими в России.
Не обнаруженоДанный результат считается нормой и свидетельствует о том, что человек здоров или концентрация вируса ниже порога определения.

Ложноположительные и ложноотрицальные результаты

Ложно положительные и ложноотрицательные результаты ПЦР исследования получаются в таких случаях:

  • при недостаточной квалификации медицинского персонала, которые проводят диагностику;
  • ошибки в работе лаборантов, когда кровь транспортируется в лабораторию ненадлежащим способом или биоматериал загрязнён;
  • случаи ненамеренной подмены проб крови;
  • нарушения в процессе подготовки биологического материала;
  • воздействие на исследуемые образцы повышенной температурой.

Среди других причин получения неточных результатов выделяют такие:

  • кровь пациента содержит остаточные частицы гепарина и прочих коагулянтов;
  • в образце присутствуют вещества-ингибиторы, способствующие замедлению или остановке полимеразной цепной реакции.

Где сделать ПЦР-диагностику и сколько стоит?

Подобные исследования проводятся:

  • в частных медицинских центрах;
  • в КДВ;
  • в государственных поликлиниках.

Государственные поликлинники проводят анализ ПЦР на гепатит С бесплатно на основаниях наличия у пациента направления от гепатолога или инфекциониста.

Диагностика заболевания на платной основе проводится во всех крупных городах России.

Стоимость диагностики зависит от:

  • качества оборудования клиники;
  • скорость выполнения работы;
  • типа теста.

Цена на изучение крови методом ПЦР колеблется в следующих пределах:

  • качественный ПЦР анализ — 600-900 рублей (в Москве и Санкт-Петербурге);
  • качественный ПЦР анализ — 300-800 рублей (регионы);
  • определение вирусной нагрузки — 17000-22000;
  • определение других видов инфекции количественного анализа 1200-10000 рублей.

Фотогалерея

Суть исследования Диагностика гепатита С Загрузка …

Ошибочные анализы на гепатит С. Снято каналом Гепатит С побежден.

Источник: https://hromosoma.com/dnk/ptsr-gepatit-c-11874/

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.